Как осаждать ДНК или белок изопропанолом?

Как осаждать ДНК или белок изопропанолом ?

На Территории биохимических экспериментах осаждение ДНК и белков является очень важной операцией , которая помогает извлекать чистые целевые вещества из образцов . Способ осаждения изопропанола стал одним из распространенных методов извлечения ДНК а также белков благодаря его простым и эффективным характеристикам . Как осаждать ДНК или белок изопропанолом ? В этой статье подробно анализируются принципы , этапы работы и области применения , чтобы помочь вам лучше понять этот процесс .

Обоснование изопропанола для осаждения ДНК или белка

Принцип способа осаждения изопропанола основан на изменении полярности растворителя . На Территории процессе экстракции добавление изопропанола снижает полярность раствора , тем самым способствуя агрегации ДНК или белковых молекул из раствора вместе с образованием осадка . Для ДНК данное отрицательно заряженная макромолекула . Когда концентрация соли в растворе высока , добавление изопропанола уменьшает гидратацию молекулы ДНК а также способствует ее осаждению . Что касается белков , изопропанол может вызывать агрегацию а также осаждение , изменяя среду гидратации вокруг белка .

Также Как осаждать ДНК изопропанолом

Ключевые шаги для осаждения ДНК

Клетки лизируются и ДНК извлекается : клетки лизируются физическими или химическими методами , высвобождая ДНК . В этом процессе можно использовать буфер , чтобы помочь стабилизировать молекулы ДНК .

Добавление соли и изопропанола : в раствор добавляют соответствующее количество соли (например, хлорид натрия или хлорид кальция ), повышая ионную силу раствора а также способствуя осаждению ДНК . Затем добавьте тот же объем изопропанола и осторожно встряхните .

Осаждение ДНК : в это время ДНК начинает накапливаться и образуется осадок . Осаждение ДНК может быть дополнительно ускорено путем выдерживания в течение 10-30 минут при низких температурах (например,-20 С ).

Центрифугирование для осуществления сбора ДНК : смесь центрифугируют , и осадок представляет собой ДНК . Осадок ДНК можно промывать 70% этанолом для удаления примесей .

Примечания

После добавления изопропанола смесь должна избегать сильных ударов , чтобы предотвратить разрушение ДНК .

Эффект осаждения ДНК тесно связан вместе с концентрацией соли и объемной долей изопропанола и должен регулироваться на территории соответствии с конкретными условиями .

Как осаждать белок с изопропанолом

Ключевые шаги для осаждения белка

Экстракция белка : сначала извлекайте белок из клетки или ткани , обычно с использованием лизата или метода фрагментации клеток для высвобождения белка из клетки .

Добавление изопропанола : в белковый раствор добавляют изопропанол , обычно в концентрации от 30% до 70%. Добавление изопропанола разрушает среду гидратации вокруг белка , что приводит к осаждению белка .

Осажденный белок : Подобно осаждению ДНК , осаждение белка может быть стимулировано низкотемпературной обработкой (-20 Вместе С ). Обычно оставляют в охлажденных условиях на 1 час или более .

Центрифугирование и сбор белкового осаждения : путем центрифугирования собирают осадок , который является целевым белком . Промывание осадка удаляет частично растворенные примеси и повышает чистоту белка .

Примечания

Для различных белков условия осаждения могут различаться , например , концентрация соли , концентрация изопропанола , температура и т . д . Условия эксперимента необходимо адаптировать к характеристикам подопытных .

При осаждении белка необходимо избегать чрезмерного перемешивания , чтобы предотвратить деградацию белка .

Преимущества и недостатки способа осаждения изопропанола

Преимущества

Простота в эксплуатации : Метод осаждения изопропанола -это недорогая и эффективная технология разделения , подходящая для различных экспериментов .

Широкая применимость : Может применяться для экстракции различных крупных молекул , таких как ДНК , РНК а также белки .

Высокая чистота : При соответствующей стадии промывки можно получить относительно чистую молекулу -мишень.

Недостатки

Ограниченная сфера применения : Для некоторых специальных образцов ДНК или белка метод осаждения изопропанола может быть неэффективным а также должен использоваться с другими методами .

Возможные потери : Во время осаждения изопропанола молекулы -мишени могут быть физически повреждены , особенно при неправильной работе .

Область применения

Метод осаждения изопропанола широко используется в биологии , медицине , пищевой науке и других областях . В частности , на территории области генной инженерии , анализа белков , фармацевтических исследований и т . д ., способ осаждения изопропанола обеспечивает простое и эффективное решение для экстракции образцов .

Резюме

Как осаждать ДНК или белок изопропанолом , необходимо сначала понять его основные принципы , контролировать концентрацию соли а также объемное соотношение изопропанола с помощью разумной экспериментальной стадии и работать на территории соответствующих температурных условиях . Будь то осаждение ДНК или белка , экспериментатор должен быть осторожным , чтобы избежать введения примесей или повреждения целевой молекулы . Этот простой и эффективный метод может помочь исследователям эффективно выделять и очищать необходимые молекулы в различных экспериментах .