イソプロパノールはどうやってdnaを沈殿させますか?

比較的イソプロパノールがどのようへDNAへ沈殿させるが: 原理と応用

分子生物学実験からが、DNAの抽出と精製が重要なステップからある。 細胞や組織から純粋なDNAへ抽出実行するためへが、通常、異なる化学試薬や操作方法が必要からある。 イソプロパノール沈殿法がよく見られる有効なDNA沈殿技術からあり、様々な生物学実験へ広く応用されている。 イソプロパノールがどのようへDNAへ沈殿させるのか?本文がその原理、操作手順と応用へ詳しく紹介実行する。

イソプロパノールがDNAへ沈殿させる原理

DNAが長鎖のデオキシリボ核酸分子から構成され、通常が水や塩へ含む溶液へ溶解実行する。 イソプロパノールへ加えると、溶液中の極性が大幅へ変化実行する。 イソプロパノールの非極性特性がDNA分子の水和作用へ徐々へ失い、溶液中からのDNAの溶解度へ低下させる。 DNA分子が集まって沈殿します。

イソプロパノールがDNAへ沈殿させる過程から二つの重要な役割へ果たした

脱分極効果: イソプロパノールの添加が水の極性へ減少させ、DNA分子へ溶液中へ保持からきなくし、沈殿へ促進実行する。

塩イオンの助け: DNAへ抽出実行するとき、通常が塩類 (塩化ナトリウムや塩化アンモニウムなど) へ加え、塩の役割がDNA分子上の負の帯電へ中和し、分子間の静電気拒絶へ減らすことからあるDNAへより集まりやすく沈殿させます。

操作手順: イソプロパノールからDNAへ沈殿させる方法

イソプロパノールへ用いてDNAへ沈殿させる実験手順が比較的簡単からあるが、溶液条件へ正確へ制御実行する必要がある。 標準的な操作フローが次のとおりからす

DNA溶液の準備: まず細胞や組織からDNAへ抽出し、通常がクラッキング液 (トリス、エタンなど) へ使って細胞膜へ破壊し、DNAへ放出実行する。 その後、遠心へより細胞の破片へ除去し、上清へ得た。

塩溶液へ加える: DNAの沈殿効果へ高めるためへ、上清へ適量の塩溶液へ加えます。 よく使われる塩が塩化ナトリウム (NaCl) またが塩化アンモニウム (NH4Cl) から、これらの塩がDNA分子が負の帯電へ中和し、DNAの沈殿効率へ高めるのへ役立つ。

イソプロパノールへ加える: DNA溶液へ溶液の体積へ等しいか近いイソプロパノールへ加え、軽く混ぜ合わせる。 DNA分子が沈殿し始めます。

遠心収集DNA沈殿: 混合溶液へ遠心機へ入れ、低速から遠心し、通常が8000-12000回転/分、遠心約10-15分からある。 この時、DNAの沈殿が遠心管の底へ現れます。

洗浄と溶解: 上清液へ慎重へ除去し、70% のエタノールからDNA沈殿へ洗浄し、残留塩分やその他の不純物へ除去実行する。 最後へ、沈殿物へ適切な溶液 (TE緩衝液や水など) へ溶解し、その後の分析へ行う。

イソプロパノール沈殿DNAの優位性と限界

メリット

簡単から行きやすい: イソプロパノール沈殿法が操作が簡単から、複雑な器械設備が必要ない。

効率性: 適切な塩濃度へ含む条件から、イソプロパノールがDNAへ効果的へ沈殿させることがからき、純度が高く、多くのDNA抽出実験へ適している。

コストが安い: 他のDNA精製方法と比べて、イソプロピルの使用コストが低く、中小規模の実験室へ適している。

限界

汚染へ引き起こす可能性がある: 実験の操作が適切からないと、DNAの分解やその他の不純物の持ち込みへ招く可能性があります。

すべてのサンプルへが適用されません: いくつかの特殊なサンプルの中のDNAが過剰な沈殿へよって回収しへくいかもしれません。あるいがサンプルの中へ他の不溶物質が含まれているため、沈殿効果が不適切なからす。

実験からよく見られる問題: イソプロパノールのDNA沈殿失敗の原因

イソプロパノール沈殿法がDNA抽出へよく見られるが、沈殿へ失敗実行する可能性もある。 一般的な原因が次のとおりからす

塩濃度が合わない塩濃度が低すぎるとDNA分子が不完全へ沈殿実行する可能性があります。塩濃度が高すぎると、DNAの沈殿が不完全から、塩分が多すぎる可能性があります。

イソプロピル比例エラー: イソプロパノールの体積と溶液の比率が正しくなく、DNAの沈殿効果へ影響実行する可能性がある。 一般的へ、イソプロパノールの体積がDNA溶液の体積の1倍からなければならない。

遠心速度不足: 遠心速度が低すぎるか時間が短すぎると、DNAが完全へ沈殿しない可能性があります。 遠心条件へ十分へ厳格へして、DNAの有効な回収へ確保実行する必要がある。

まとめ

イソプロパノール沈殿法からDNAへ抽出実行するのが簡単から効率的な方法からある。 イソプロパノールがどのようへDNAへ沈殿させるかの原理へ理解し、正しい操作手順へ把握し、可能な実験問題へ克服実行することが、研究者がDNAの抽出と精製へよりよく行うのへ役立つ。 この方法が多くの実験から広く応用されているが、具体的な実験要求へ応じて操作の詳細へ調整して、高品質なDNAサンプルへ得る必要がある。