Как изопропанол осаждается dna

Как изопропанол осаждает ДНК : принцип а также применение

В экспериментах по молекулярной биологии экстракция и очистка ДНК являются решающими этапами . Для извлечения чистой ДНК из клетки или ткани обычно требуются различные химические реагенты и способы их проведения . Метод осаждения изопропанола является распространенным и эффективным методом осаждения ДНК , который широко используется на территории различных биологических экспериментах . Как изопропанол осаждает ДНК ? В этой статье подробно описаны принципы , этапы работы а также приложения .

Принцип осаждения ДНК изопропанола

ДНК состоит из длинноцепочечных молекул ДНК , которые обычно растворяются в воде или солевом растворе . При добавлении изопропанола полярность в растворе сильно изменяется . Неполярные свойства изопропанола приводят к постепенной потере гидратации молекул ДНК , что приводит к снижению растворимости ДНК в растворе . В данное время молекулы ДНК собираются и осаждаются .

Изопропанол играет две ключевые роли в процессе осаждения ДНК :

Эффект деполяризации : Добавление изопропанола уменьшает полярность воды , так что молекула ДНК не может удерживаться на территории растворе , тем самым способствуя ее осаждению .

Помощь ионов соли : При извлечении ДНК обычно добавляют соли (такие как хлорид натрия или хлорид аммония ). Роль соли заключается в нейтрализации отрицательных зарядов на молекулах ДНК , уменьшении электростатического отталкивания между молекулами и облегчении агрегации и осаждения ДНК .

Шаги работы : Как осаждать ДНК изопропанолом

Экспериментальная стадия осаждения ДНК вместе с использованием изопропанола является относительно простой , но требует точного контроля состояния раствора . Ниже приведены стандартные рабочие процессы :

Подготовка раствора ДНК : ДНК сначала извлекают из клеток или тканей , обычно используя лизат (например, Трис , ЭДТА , NaCl и т . д .) для разрушения клеточной мембраны а также высвобождения ДНК . Затем клеточные фрагменты удаляли центрифугированием с получением надосадочной жидкости .

Добавить раствор соли : Чтобы усилить эффект осаждения ДНК , к надосадочной жидкости добавляют соответствующее количество солевого раствора . Обычно используемые соли включают хлорид натрия (NaCl) или хлорид аммония (NH4Cl), которые могут помочь молекулам ДНК нейтрализовать отрицательный заряд а также повысить эффективность осаждения ДНК .

Добавление изопропанола : К раствору ДНК добавляют изопропанол , который равен или близок к объему раствора , и аккуратно перемешивают . В это время молекулы ДНК начнут осаждаться .

Центрифугирование для сбора осаждения ДНК : Смешанный раствор помещают в центрифугу и центрифугируют на низкой скорости , обычно 8000-12000 об /мин, центрифугируют в течение примерно 10-15 минут . В это время на дне центрифужной пробирки появляется осадок ДНК .

Очистка и растворение : Осторожно удаляйте надосадочную жидкость , промывая осадок ДНК 70% этанолом для удаления остаточных солей а также других примесей . Наконец , осадок растворяли в подходящем растворе , таком как TE буфер или вода , для последующего анализа .

Преимущества и ограничения изопропанола для осаждения ДНК

Преимущество

Легко а также легко : Метод осаждения изопропанола прост в эксплуатации а также не требует сложных инструментов и оборудования .

Эффективность : В условиях , содержащих соответствующую концентрацию соли , изопропанол может эффективно осаждать ДНК с высокой чистотой и подходит для большинства экспериментов по экстракции ДНК .

Низкая стоимость : По сравнению вместе с другими методами очистки ДНК , изопропанол менее дорогостоящий а также подходит для осуществления малого и среднего лабораторного использования .

Ограничения

Может привести к загрязнениюЕсли эксперимент не был проведен должным образом , это может привести к деградации ДНК или к другим примесям .

Не для всех образцов : ДНК в некоторых специальных образцах может быть трудно восстановить из -за чрезмерного осаждения или из -за других нерастворимых веществ на территории образцах эффект осаждения плохой .

Часто задаваемые вопросы в эксперименте : причины неудачного осаждения ДНК изопропанола

Хотя способ осаждения изопропанола очень распространен при экстракции ДНК , возможны также случаи неудачного осаждения . Общие причины включают в себя :

Концентрация соли не подходит : Слишком низкая концентрация соли может привести к неполному осаждению молекул ДНК , слишком высокая концентрация соли может привести к неполному осаждению ДНК с чрезмерным содержанием соли .

Неправильное соотношение изопропанола : Неправильное отношение объема изопропанола к раствору может повлиять на эффект осаждения ДНК . Как правило , объем изопропанола должен быть в 1 раз больше объема раствора ДНК .

Недостаточная скорость центрифугированияСлишком низкая скорость центрифугирования или слишком короткое время могут привести к тому , что ДНК не будет полностью осаждена . Необходимо обеспечить , чтобы условия центрифугирования были достаточно строгими , чтобы гарантировать эффективное восстановление ДНК .

Резюме

Экстракция ДНК путем осаждения изопропанола является простым а также эффективным методом . Понимание принципа того , также как изопропанол осаждает ДНК , овладение правильными этапами работы и преодоление возможных экспериментальных проблем могут помочь исследователям лучше извлекать и очищать ДНК . Хотя этот метод широко используется во многих экспериментах , детали операции также необходимо корректировать в соответствии вместе с конкретными экспериментальными требованиями для осуществления получения высококачественных образцов ДНК .